Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病症进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失家兔性疾病球蛋白到消失1M-高血压临床研究工作疼痛的令人满意率在儿童之前后期就有更好的所述，多个家兔性疾病球蛋白阴性的儿童之前有70%在血清转化后10年内患上高血压，而随访15年的儿童这一数量减低到84%。来得之下，占临床研究工作1M-高血压一半以上的M-1M-高血压的发病机制还没有取得充分的研究工作。

越来越多的人开始可用分期种系统来表述1M-高血压的令人满意：变异在消失多种家兔性疾病球蛋白时进入第1阶段性，消失血糖反常时进入第2阶段性，消失疼痛时进入第3阶段性。一些多发家兔性疾病球蛋白阴性的变异，在1期和2期，令人满意慢速，并拓展为发病的1M-高血压。我们之前所述了一分组在首次侦测到多种家兔性疾病球蛋白样本后有数10年无高血压的近乎慢速令人满意者，这分组病人人数不算，但特征近乎为恰当。随后，我们发现家兔自身抗原特异性CD8+T细胞会质子化在令人满意较快速的病人之前基本不或多或不算，但在近期发病和长期或多或不算的高血压病人之前很容易侦测到。这可能指出新，与令人满意病人来得，这些病人性疾病质子化的平衡增强。

早期研究工作指出新，尽管平衡性T细胞会(Treg)生产量正常，但高血压病人或多或不算一些系统毛病，其之前有数对IL-2的质子化意志力减低。此外，高血压病人之前的波动CD4+T细胞会可能对平衡更具抵抗性，观感为波动T细胞会的诱发减弱，人为造成了的Treg和体外造成了的诱导Treg，以及抗原亲身经历的CD4+T细胞会之前IL-2质子化减弱。本研究工作的目的是所述了CD4+平衡性T细胞会(Treg)在一小群近乎较快速令人满意者之前的特征，他们的平均年纪为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX研究工作是一项以人群为基础的纵向研究工作，在21岁以下确诊的病人亲属之前检查1M-高血压的危险因素。我们之前所述了长期较快速令人满意者的特征，他们保持多重家兔性疾病球蛋白阴性超过10年，但没有消失高血压的临床研究工作疼痛，慢速性或非展开性性疾病。随后，10名在此之后保持无高血压并情愿提供大量血液样本的较快速令人满意者纳入T和B细胞会系统分析。在目前的研究工作之前，8名慢速令人满意者(SP分组)，之前位年纪43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的家兔性疾病球蛋白阴性。所有的组织者都处于1M-高血压令人满意的1期，尽管一些人随后失去了家兔性疾病球蛋白对某些抗原的阴性质子化，然而，一名病人已经处于2期有数6年，但没有消失临床研究工作疼痛，一名病人被确诊为高血压，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析之前对该酪氨酸展开了单独检验。分离外周血单个核细胞会(PBMCs)，运用于多值流式细胞会术和T细胞会诱发检验检验酪氨酸之前Treg的Hz、表M-和系统。可用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和重归)展开无监督聚类分析，检验Treg表M-。

结果：与身体健康酪氨酸来得，来自慢速令人满意体的无意识CD4+T细胞会的监督聚类表明，激能活的无意识CD4+ TregHz减低，与糖皮质激素诱导的TNFR无关蛋白(GITR)强调减低有关。一名HbA1c升高的病人与令人满意较快速者和也就是说的对照分组来得，Treg谱大同小异。系统分析指出新，与身体健康酪氨酸来得，来自较快速令人满意体的Treg介导的CD4+波动T细胞会诱发明显毁损。观感为对波动CD4+T细胞会CD25和CD134强调的诱发减低。

所示1 深入的表M-分析表明，CD4+Treg亚M-在慢速令人满意缓冲区之前减低。由FlowSOM转化成的Treg室，聚集在来自所有酪氨酸的能活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标上物强调断定出新10个元簇:无意识T细胞会_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞会;HLA-DR + GITR +无意识T细胞会;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)可用9个不尽相同Treg标上转化成的10个元簇的MST。每个数据流代表者一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在数据流分组周围上色。每个数据流之前的饼所示透露单个标上的强调级别。(b)每个元聚类的热所示，以表明整体标上强调。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转化成所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖物。(e-l)一般来说金属量为每个metacluster箱直通所示(金属量> 0.05%)确定为HD和SP分组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞会(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞会(l)。橙色橘色代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 可用CITRUS的预测模M-证实，TregHz的减低是令人满意较快速的标志。分级介导(a - f)和柑橘分析(g-k)较为SP组织者和也就是说的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表者性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调展开分离，仿真FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)分组以及酪氨酸SP 606(橙色)之前CD25+ cd127的Hz统计所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导子集的箱直通所示;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，对角厚实的簇被识别为SP和HD缓冲区两者之间的不尽相同。(j)箱直通所示表明了在SP(虎纹)和HD(灰点)分组之前，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的一般来说金属量(数量)。(k)直方所示表明每个簇的表M-(粉红色)和Treg标上一般来说强调与背景强调(黄色);上列，闪存Treg_3;下面四人，闪存Treg_4。背景与所有其他簇之前标上的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩检验

所示3 与身体健康献血者来得，令人满意较快速者无意识treg的GITR减低。每个无意识CD4+T细胞会元簇(无意识T细胞会_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞会;HLA-DR + GITR +无意识T细胞会;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个强调标上的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的强调热所示(sp606不有数在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR强调接在，表明直方所示(c)和统计所示(d)。Wilcoxon配对大写字母秩和检验，p< 0.07(橙色)所有酪氨酸有数，p< 0.05(黄色)酪氨酸SP 606和也就是说的HD不有数在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR强调，从分级介导，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(橙色)接在，表明直方所示(e)和统计所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写字母秩检验

所示4 来自较快速令人满意的CD4+ treg细胞会控制波动CD4+T细胞会的意志力减低。SP分组用黄色的直通和橘色透露，HD分组用黑色的直通和橘色透露，橙色的直通/橘色透露酪氨酸sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(转发者)被标上为CFSE, Treg按辨别的数量滴定。用抗CD3 /28微珠转化细胞会，培养3当晚展开流式细胞会术侦测。(a-d)与CD4+转发者一般来说应以的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发%-。可用阴性对照(激能活的叛离以细胞会不含treg)计算诱发%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

所示5 波动CD4+T细胞会对较快速令人满意的T细胞会转化的诱发更敏感。SP分组用黄色的直通和橘色透露，HD分组用黑色的直通和橘色透露，橙色的直通/橘色透露酪氨酸sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标上，treg按辨别的数量滴定。用抗CD3 /28微珠转化细胞会，培养3当晚展开流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者合作培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发百分率(b)。(c,d) CD25诱发百分率(c)和CD134诱发百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养之前的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

论据：我们得出新的论据是，来自较快速令人满意子的转化无意识CD4+Treg在GITR强调之前取得了扩展和独特，强调了进一步研究工作Treg在1M-高血压后果变异之前的系统性的必要性。

原意出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28